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Como calcular a concentração de DNA?
Para estimar a concentração de DNA utiliza-se a seguinte relação: 1 OD260 = 50 μg DNA dupla-hélice (Regitano, 2001; Sambrook, 2002). As proteínas absorvem luz no comprimento de onda de 280 nm. Sendo assim, a relação A260/A280 fornece um parâmetro de avaliação da qualidade das preparações de ácidos nucléicos.
Como utilizar o Nano Drop?
O espectrofotômetro NanoDrop Lite da Thermo Scientific ™ é um espectrofotômetro microvolume UV-Vis, compacto. Ele fornece medidas rápidas, precisas e reprodutíveis de microvolumes de amostras, sem a necessidade de diluições. O equipamento quantifica amostras de DNA, RNA e proteínas.
Quanto às razões 260 280 e 260 230?
Taxa 260/280 e 260/230 A taxa de absorção 260/280 é uma boa indicadora de contaminação de proteína: quando ≥ 1,8, indica uma amostra de DNA pura. A taxa de absorção 260/230, quando menor do que 1,8, indica contaminação provavelmente causada por compostos orgânicos ou agentes caotrópicos, que absorvem a 230 nm.
Como diluir o DNA?
Ajustar o volume para 100 ml com água estéril. Não é necessário este- rilizar. Armazenar em temperatura ambiente. Diluir 736,8 ml de álcool comercial a 95 \% em 263,20 ml de água estéril.
Como calcular o tamanho do DNA?
Sabe-se que o genoma humano tem cerca de 6 mil milhões de pares de base de comprimentos . Cada par de base tem 3,4×10^-10 m de comprimento (3,4 Angstrom). Portanto, cada célula terá cerca de 2 m de DNA. Multiplicando pelo número de células do corpo humano (1×10^13), obtemos o valor de 2×10^10 km.
Para que serve o espectrômetro?
O espectrofotômetro é o equipamento utilizado para determinar os valores de transmitância (luz transmitida) e absorbância (luz absorvida) de uma solução em um ou mais comprimentos de onda. Ele mede a quantidade de fótons (a intensidade da luz) absorvida depois de passar pela amostra.
Como se extrai DNA para análise?
A extração de DNA inclui basicamente dois procedimentos principais: a lise das células presentes na amostra e a purificação do DNA. Após a lise das células, o DNA deve ser separado dos restos celulares e das proteínas, precipitado e suspenso em volume adequado de água ultrapura ou soluções-tampão adequadas.